Nuevas técnicas de contrastación seminal
El eyaculado es una población de células espermáticas contenidas en plasma seminal que presentan diferentes grados de maduración, vitalidad, y calidad. La evaluación del eyaculado, por tanto, consiste en averiguar la cantidad de espermatozoides que están vivos y son capaces de realizar su función que es la fertilización del ovocito.

 
Para ello los espermatozoides necesitan haber alcanzado una serie de características:
 

· Morfología adecuada.

· Integridad de la membrana plasmática.

· Integridad del acrosoma.

· Capacidad de movimiento.

· Integridad del ADN.
 

De forma rutinaria, la evaluación de un eyaculado sólo abarca el control de la morfología y de la capacidad de movimiento. El estudio del porcentaje de motilidad nos indica el número de espermatozoides del eyaculado que en ese momento presentan intacta su capacidad de movimiento.

En muy contados casos se utiliza también el estudio del porcentaje de acrosomas normales para controlar el número de espermatozoides con el acrosoma intacto. Este parámetro es muy importante también para el control de la capacidad de conservación del semen.
 

Pero, con esta contrastación rutinaria dejamos varios aspectos sin controlar.

La integridad de membranas es un aspecto fundamental, ya que las funciones de la membrana plasmática son cruciales para la capacidad fecundante del espermatozoide.
 
En GVP somos conscientes de esto por lo que nuestro departamento de I+D ha desarrollado técnicas sencillas para evaluar la integridad de las membranas como el HOST corto (HOSTc) y el HPAR y algo más complejas como el test sHV.
 

El HOSTc consiste en someter al espermatozoide a un test hipoosmótico a

37ºC para chequear la resistencia de las membranas y su capacidad de intercambio de líquidos. Es una modificación del test HOST diseñado para semen

humano. En varios estudios realizados en GVP el HOSTc presentó correlación significativa con los resultados de fertilidad in vivo.
 
El HPAR es la cuantificación de la subpoblación de espermatozoides HOSTc positivos que conservan el acrosoma resistente después del choque hipoosmótico y térmico. Este parámetro es también de interés en el estudio de la duración del semen en conservación.
 

El test sHV combina las características observadas en el HOSTc con el uso de fluorocromos para estudiar al mismo tiempo la vitalidad celular. Así obtenemos datos, entre otros, de la subpoblación de espermatozoides HOSTc positivos con el acrosoma intacto y vivos, la cual, hemos observado que presenta diferencias entre verracos, lo que resulta de gran interés en la evaluación de los eyaculados.

 
Consideramos que el estudio de la integridad del ADN espermático es importante para completar la información obtenida en la contrastación del eyaculado. Para ello utilizamos la técnica SDC (Sperm Chromatin Dispersion test, kit Halomax). Con esta técnica se provoca la dispersión del ADN fragmentado en una matriz de agar, formando un halo alrededor de la cabeza del espermatozoide, que luego se tiñe para facilitar su visualización y contaje.
En nuestros estudios, un 15 % de los eyaculados presentó un índice de fragmentación del ADN mayor al 5 %. Además,los resultados de esta prueba presentaron correlación con el porcentaje de gotas proximales, es decir, con el grado de maduración del espermatozoide.
 
Los resultados obtenidos en nuestros estudios justifican el uso más frecuente de estas técnicas para controlar mejor la calidad seminal de los eyaculados utilizados en inseminación artificial, permitiendo la clasificación de los verracos por su calidad seminal de tal forma que sean los mejores los que se conserven más tiempo y los que se envíen desde los CIA a los lugares más lejanos o con las condiciones meteorológicas más adversas, puesto que serán los que mejor aguanten.
 
Actualmente nosotros utilizamos estas pruebas para el control de la calidad de los eyaculados que van a ser conservados mediante congelación, ya que se necesita una selección previa para garantizar los mejores resultados en la calidad del semen descongelado.
 
 
         
   Host corto - Hpar                                                   sCD                                                                       sHV